[0002] 脱氧胆酸钠，分子式★：C24H3904Na，中文别名：3 α，12 α -二羟-5 β -胆烷酸钠★、去氧 胆酸钠，分子量：414★. 55★。脱氧胆酸钠是白色粉末或结晶性粉末。易溶于水★，微溶于无水乙 醇★，不溶于。比旋光度约+42.5° (c=2,水中）。低毒，半数致死量（大鼠★，经口）为 1370mg/kg★。
【专利摘要】本发明提供了一种适用面广，准确度高的脱氧胆酸钠的分光光度检测方法。所述检测方法包括★：（1)绘制标准曲线：制备脱氧胆酸钠标准工作液，用所述的标准工作液配制一系列不同浓度的脱氧胆酸钠标准品，与硫酸溶液进行反应，分光光度计测定吸光值★，作出标准曲线)对待测样品进行采样★，制备加标样品；（3)检测加标样品★；（4)计算检测结果、分析样品脱氧胆酸钠的含量。本发明方法简单★、易实施，且检测灵敏度高，检测设备成本低，在一般实验室普遍适用★。
[0024] 其中★，步骤（1)的具体步骤为：1)配制浓度为lmg/ml脱氧胆酸钠标准溶液★，将lmg/ ml的脱氧胆酸钠标准溶液采用醋酸溶液稀释配制成100 μ g/ml的脱氧胆酸钠标准工作 液★。精确量取稀释后的100 μ g/ml的脱氧胆酸钠标准工作液0★. 05ml、0★. lml、0. 2ml、0. 3ml★、 0. 4ml分别置于试管中★，补醋酸至0. 5ml，获得脱氧胆酸钠标准品★，同时制备空白对照管。2) 各管中分别加入7ml43. 5%硫酸溶液，混匀★，盖上试管塞★，于70°C以上放置时间在20min以上 进行反应★，然后将反应后的溶液置于室温冷却，冷却后在波长387nm处测定吸光值★。以脱氧 胆酸钠标准品的含量（μ g/ml)为横坐标★，以吸光值为纵坐标，作标准曲线★。列出线性方程 及相关系数，要求相关系数R2 〇★. 98 ;
[0025] 优选地★，所述步骤（1)中不同浓度的脱氧胆酸钠标准品与硫酸溶液进行反应的反 应条件为70°C水浴90min，置于室温冷却★，将反应后的各溶液在波长387nm处测定吸光值★。
1★.数字信号处理 2.传感器技术及应用 3.机电一体化产品开发 4.机械工程测试技术 5.逆向工程技术研究
取代的2′，3′-二脱氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷类★，它们的制备方法以及它们在医药方面 ...的制作方法
3. 根据权利要求1或2所述的分光光度检测方法★，其特征在于★，所述步骤（1)中不同 浓度的脱氧胆酸钠标准品与硫酸溶液进行反应的反应条件为70°C以上水浴，反应20min以 上，置于室温冷却，将反应后的各溶液在波长387nm处测定吸光值。
[0029] 本发明检测方法的原理为脱氧胆酸钠和硫酸在一定温度下形成黄色复合物，此复 合物在387nm处的吸光值与去氧胆酸含量成正比★。用读取的吸光值与脱氧胆酸钠含量绘制 曲线，将样本读取的吸光值代入曲线，计算样本脱氧胆酸钠含量。本发明经过试验研究发 现★，酸反应条件调整为70°C以上★、反应时间20min以上，可将溶液中脱氧胆酸钠和硫酸结合 的更充分，使反应更加彻底★，在提高反应条件后★，脱氧胆酸钠标准品的吸光值有显著提高， 标准曲线相关系数明显提高★，样本加标回收率可提高至80%?120%，依据《生物制品质量控 制分析方法验证技术审评一般原则》★，本发明所述检测方法可准确有效检测样本的脱氧胆 酸钠含量，从而更客观准确的评价制品质量。
[0011] (3)检测加标样品：步骤（2)所述加标样品与硫酸溶液进行反应，反应条件与步骤 (1)相同，分光光度计测定吸光值；
[0013] 将各样品的吸光值代入脱氧胆酸钠标准曲线方程，计算待测样品中的脱氧胆酸钠 含量，再乘以待测样品的稀释倍数即为该样本的脱氧胆酸钠的含量。
4★. 根据权利要求3所述的分光光度检测方法，其特征在于，所述步骤（1)中不同浓度的 脱氧胆酸钠标准品与硫酸溶液进行反应的反应条件为70°C水浴90min★，置于室温冷却，将 反应后的各溶液在波长387nm处测定吸光值★。
[0028] 所述疫苗包括肺炎球菌、b型流感嗜血杆菌、、伤寒、副伤寒、甲型肝炎、乙型肝 炎和EV71的疫苗★。
[0007] 为了解决现有技术中存在的问题★，本发明的目的是提供一种可以在普通实验室广 泛使用，且检测灵敏度高的脱氧胆酸钠的检测方法。
[0027] 所述生物制品包括疫苗生广中的工序广品、原液、半成品和成品。
2. 根据权利要求1所述的分光光度检测方法，其特征在于★，步骤（1)中将不同浓度的脱 氧胆酸钠标准品分别取〇. 5ml与7ml43. 5% (质量百分比）的硫酸溶液进行反应。
[0008] 为了实现本发明目的★，本发明提供了一种脱氧胆酸钠的分光光度检测方法，所述 分光光度检测方法的步骤为：
[0030] 本发明建立的分光光度检测方法简单★、快速、易实施★，避免了高端、精密、昂贵利来老牌国际怎么样、操 作复杂、试验周期较长的设备与方法的引入，又克服了原有的比色方法对某些生物制品水 解不充分、测定结果不准确的问题★。本发明采用简单的方式解决了脱氧胆酸钠含量的检测 问题★，检测灵敏度与高效液相方法基本一致，建立了一种一般实验室普遍适用的脱氧胆酸 钠含量检测方法★。
[0026] 本发明还提供了所述分光光度检测方法在检测生物制品脱氧胆酸钠含量中的应 用★。
1. 一种脱氧胆酸钠的分光光度检测方法★，其特征在于，所述分光光度检测方法的步骤 为： (1) 绘制标准曲线：制备脱氧胆酸钠标准工作液，用所述的标准工作液配制一系列不同 浓度的脱氧胆酸钠标准品，与硫酸溶液进行反应，分光光度计测定吸光值，作出标准曲线) 对待测样品进行采样★，制备加标样品； (3) 检测加标样品：步骤（2)所述加标样品与硫酸溶液进行反应，反应条件与步骤（1) 相同，分光光度计测定吸光值★； (4) 计算检测结果、分析样品脱氧胆酸钠的含量。
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[0009] (1)绘制标准曲线：制备脱氧胆酸钠标准工作液，用所述的标准工作液配制一系列 不同浓度的脱氧胆酸钠标准品，与硫酸溶液进行反应，分光光度计测定吸光值，以标准品中 脱氧胆酸钠含量（μ g/ml)为横坐标，以吸光值为纵坐标★，作出标准曲线★；列出线性方程及 相关系数，要求相关系数R2 0. 98 ;
5★. 权利要求1所述的分光光度检测方法在检测生物制品脱氧胆酸钠含量中的应用。
[0006] 因此，需要建立一种可以在普通实验室广泛使用，能够适用于不同样品★，且检测灵 敏度高的脱氧胆酸钠的检测方法。
[0018] a--标准曲线] b--标注曲线 :样本脱氧胆酸钠含量计算
7. 根据权利要求6所述的应用利来老牌国际怎么样★，其特征在于，所述疫苗包括肺炎球菌、b型流感嗜血杆 菌、、伤寒、副伤寒、甲型肝炎★、乙型肝炎和EV71的疫苗。
[0017] X--稀释后标准系列及样本的脱氧胆酸钠浓度，μ g/ml ★;
【发明者】孙胜军, 赵喆, 陆玮★, 蔡芳★, 王见冬★, 高强 申请人:北京科兴生物制品有限公司
[0033] 采用《中华人民共和国药典》2010年版三部第124页甲型肝炎灭活疫苗（人二倍 体细胞）附录1《脱氧胆酸钠残留量测定法》，对肺炎球菌多糖中的脱氧胆酸钠含量进行加 标回收试验★。取供试品〇. 25ml★，分别加入浓度20 μ g/ml、60 μ g/ml、80 μ g/ml的脱氧胆酸钠 标准品0. 25ml，作为样品，检测其中的脱氧胆酸钠含量。计算添加标准品后样品中的脱氧胆 酸钠含量及加标回收率，详见表1。
[0003] 脱氧胆酸钠分子能够改变磷脂酰基链的排列，影响其协同性，同时能够降低磷脂 脂质体的稳定性。脱氧胆酸钠与磷脂双层膜作用后不仅仅是简单地镶嵌在磷脂膜上，而且 能够使磷脂膜形成孔洞或缺陷★。由于脱氧胆酸钠的上述特性★，可以用于病毒或者细菌类疫 苗生产过程中的细胞消化，抗原纯化与灭活，这些反应是一个复杂的生物物理变化过程★，反 应前后脱氧胆酸钠的结构和性质不发生变化★。
6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于★，所述生物制品包括疫苗生产中的工序产 品★、原液、半成品和成品。
[0004] 生产上，在细菌类疫苗的生产过程中，发酵液采用脱氧胆酸钠进行灭活，而在病毒 类疫苗的生产过程中也需要添加脱氧胆酸钠进行前期预处理。脱氧胆酸钠作为一种外源物 质，自身具有一定的毒性★。因此★，在上述生物制剂有效成分的纯化过程中需对其进行去除★， 而若不能有效去除脱氧胆酸钠，可能造成脱氧胆酸钠含量过高从而导致对人体的毒副作 用★。因此为了有效控制产品质量，在生产过程有效地监控脱氧胆酸钠的去除趋势，检测纯化 样品与终产品的含量或者含量，对疫苗的质控起着至关重要的作用。因而建立一种准确地 测定生物制品中脱氧胆酸钠含量的方法对疫苗质量控制意义深远。
[0001] 本发明涉及一种检测方法，具体地说★，涉及一种脱氧胆酸钠的检测方法。
[0005] 目前对生物制品中的脱氧胆酸钠含量的检测尚未有纳入到《中华人民共和国药 典》2010年版三部的通用方法。根据《中华人民共和国药典》2010年版三部第124页甲型 肝炎灭活疫苗（人二倍体细胞）附录1《脱氧胆酸钠残留量测定法》的方法进行多糖等样 品中的脱氧胆酸钠含量测定时发现试验方法具有不适用性★，不同样品的检测结果不同★，添 加的标准物质的检测结果普遍偏低★，说明检测结果不准确。
